BUNSEN本生小課堂：白介素ELISA試劑盒結果異常分析

　　白細胞介素，簡稱白介素，是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協(xié)調，相互作用，共同完成造血和免疫調節(jié)功能。白細胞介素在傳遞信息，激活與調節(jié)免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。

　　白介素ELISA檢測試劑盒兩大問題

　　問題一：造成白介素ELISA試劑盒結果異常的原因

　　A、試劑盒沒有按規(guī)定進行保存，受高溫影響。

　　B、試劑盒、樣品用前未平衡至室溫。

　　C、加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。

　　D、必須在有效期內使用，超過有效期的產品可能會產生很弱的信號。

　　E、孵育時間及孵育溫度未達到要求，反應板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調整。

　　F、洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。

　　G、蒸餾水水質有問題。

　　H、洗板次數過多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時間太長。

　　I、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

　　問題二：白介素ELISA試劑盒顯色反響應避光運用

　　白介素ELISA試劑盒目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后?？沙尸F呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構成和試驗的條件不一樣而異，因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當提高溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時刻應按規(guī)則力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行，時刻通常不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反響時刻，及時判別。

　　OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，ELISA試劑盒再延伸反響時刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反響結束時參加停止液停止反響。OPD產品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。

　　TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上，邊反響調查成果。但為確保試驗成果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)則的恰當時刻閱覽成果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達頂feng峰，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時后即可徹di衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色維持較長時刻(12-24小時)不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。

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